微生物檢驗注意事項（菌落總數(shù)、大腸菌群、培養(yǎng)基制備、無菌操作等）

一、微生物實驗室注意事項

1、工作室要矮小平整、光滑、無凹凸不平或棱角、四壁及屋頂用不透水之材質(zhì)，便于擦洗及殺菌。

2、室內(nèi)采光面積應(yīng)大，從室外應(yīng)能看到室內(nèi)的情況。

3、為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設(shè)緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間，其面積可小于無菌室。

4、無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以一米為宜，其電源開關(guān)應(yīng)設(shè)在室外。

5、無菌室與緩沖間進出口應(yīng)設(shè)推拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門要錯開，以免空氣對流造成污染。

二、使用無菌室注意事項

1、無菌室要保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放必要的檢驗用品，如：酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、記號鉛等。

2、室內(nèi)檢驗用具及桌凳應(yīng)保持固定位置，不隨便移動。

3、每2周用2%消毒液（二氧化氯等）水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌凳及地面，然后用二氧化氯溶液噴霧消毒空氣或過氧乙酸熏蒸，紫外燈殺菌。

4、定期檢查室內(nèi)空氣無菌狀態(tài)，進行細菌和霉菌的檢查。

5、無菌室殺菌前應(yīng)將所有物品置于操作之部位，然后打開紫外燈殺菌半小時，時間一到，關(guān)閉紫外燈待用。

6、操作應(yīng)嚴格按照無菌操作規(guī)定進行，操作少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。

三、配制培養(yǎng)基注意事項

1、滅菌時嚴格按照規(guī)定加熱、加壓，切忌時間過長壓力過高，否則會造成營養(yǎng)成分的破壞。

2、切忌使用銅鍋、鐵鍋配制培養(yǎng)基。

3、培養(yǎng)基不能二次高壓滅菌。

4、劃線用培養(yǎng)基可放入冰箱或培養(yǎng)箱除去水分。 

四、無菌操作注意事項

1、進入無菌室之前先進行空氣消毒，工作人員進入無菌室以前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。

2、動作要輕，盡量減少走動，以免攪動空氣。

3、操作要靠近酒精燈火焰區(qū)，使用吸管要用吸球。

4、接種環(huán)/接種針用前用后進行火焰滅菌。

5、工作結(jié)束作好終末消毒，所有培養(yǎng)物均應(yīng)高壓滅菌后再扔掉，以免污染環(huán)境。

五、菌落總數(shù)測定注意事項

1、選取樣品要有代表性，如為固體樣品要多采幾個部位，液體檢樣要混勻。

2、每次做樣從開始到結(jié)束都要進行超凈臺空氣凈度的監(jiān)測，同時對所有滅菌物品做空白對照。

3、為減少稀釋倍數(shù)的誤差，在做連續(xù)遞增稀釋時，每一稀釋液應(yīng)充分振搖使其均勻，同時每一稀釋度換一支吸管。

4、在進行連續(xù)稀釋時，應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿壁流入，勿使吸管觸及稀釋液。

5、傾倒營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板時，溫度要在46±1℃之間，數(shù)量要在15ml左右為宜，不要太多太少。

6、培養(yǎng)物48h培養(yǎng)后培養(yǎng)基失重不超過15%，培養(yǎng)箱內(nèi)要放水。

7、檢樣加入平皿后應(yīng)立即傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻，一般從稀釋到傾注不超過20分鐘。

8、平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時：菌落之間無明顯界限且僅有一條鏈可視為一個菌落，如為不同來源的幾條鏈則將每條鏈各做一個菌落記。

9、做菌落記數(shù)時平板里所有的菌落都要記數(shù)。

六、大腸菌群注意事項

1、對乳糖膽鹽管產(chǎn)氣的觀察只要有氣泡往上冒就算產(chǎn)氣。

2、在伊紅美蘭瓊脂平板上挑取菌落時一定要選典型菌落。

七、霉菌、酵母菌檢驗注意事項

1、稀釋樣品時用無菌水。

2、3天觀察時把所有的酵母菌做標記。

3、如果有霉菌被培養(yǎng)出，請不要把皿蓋隨便打開，待培養(yǎng)物高壓滅菌后再清洗。

八、壞包分析注意事項

1、對已開包的酸包脹包要馬上轉(zhuǎn)移到無菌瓶中，已防二次污染。

2、根據(jù)壞包的不同表現(xiàn)狀態(tài)適當?shù)倪x擇培養(yǎng)項目。

3、做微生物培養(yǎng)的同時測定感官、理化指標，注意其有何變化。

九、商業(yè)無菌注意事項

1、要求有厭氧培養(yǎng)的一定要在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)。

2、取樣測pH值，要與同批正常樣相比，看是否有顯著差異。

3、對pH 值有可疑的樣品都要做涂片染色鏡檢，與同批正常樣相比，看是否有明顯的微生物增殖現(xiàn)象。

4、保溫期間出現(xiàn)的脹包，漏包、或開包發(fā)現(xiàn)PH、感官異常、變質(zhì)，進一步鏡檢發(fā)現(xiàn)有異常數(shù)量細菌的樣品均應(yīng)進行劃線培養(yǎng)。